ایجاد سویه پیکیا پاستوریس مقاوم به مایکوفنولیک اسید از طریق انتقال ژن کدکننده اینوزین مونوفسفات دهیدروژنا

مایکوفنولیک اسید با مهار آنزیم اینوزین منوفسفات دهیدروژناز باعث جلوگیری از انجام مرحله ی کلیدی سنتز نوکلئوزیدهای پورینی یعنی اکسیداسیون اینوزین منوفسفات به گوانوزین منوفسفات می شود.علیرغم اهمیت این دارو و کاربردهای رو به افزایش آن، اطلاعات کمی راجع به آنزیم های درگیر در مسیر تولید mpa در قارچ ها ی تولید کننده ی این ماده موجود است بنابراین، لزوم طراحی یک سیستم بیولوژیکی در تولید این ترکیب احساس می شود.ژن کدکننده آنزیم اینوزین منوفسفات دهیدروژناز (impdh) با استفاده از یک جفت آغازگر اختصاصی توسط pcr از ژنوم قارچ پنی سیلیوم بروی کامپکتوم تکثیر شد. قطعه موردنظر در t/a وکتور همسانه سازی و حضور ژن به روشهای colony pcr، برش آنزیمی و تعیین توالی تائید شد. سپس ژن مورد نظر در وکتور بیانی ppiczb کلون و برای انتقال به مخمر پیکیا پاستوریس آماده شد. انتقال ژن به سلول های مخمری به روش الکتروپوریشن انجام گردید و پروتین نوترکیب تحت کنترل پروموتر aox1در محیط القایی حاوی متانول بیان شد. سپس مقاومت سلول های نوترکیب نسبت به mpa بررسی شد. هم چنین میزان فعالیت آنزیم نوترکیب با بررسی میزان nadh آزادشده در محیط محاسبه گردید. نتایج بدست آمده حاکی از تولید سویه ی نوترکیبی است که در مقایسه با سویه ی وحشی ده برابر نسبت به mpa مقاوم تر است.